易发彩票欢迎您的到来!

公司公告

更多公告>>
技术文章
当前位置:首页 > 技术文章 > 温度梯度PCR和降落PCR
温度梯度PCR和降落PCR
点击次数:41 发布时间:2019-04-23

关于温度梯度PCR和降落PCR的区别:

  温度梯度PCR是指在退火温度不太明确时,为了找到优退火温度,在一台PCR仪上同时做多管PCR,每一管放在仪器内不同列(有的是不同行)上,分别进行PCR(如50~60可以分6管,分别为505254565860度),最后看看哪个温度的效果好。总之是用来进行退火温度优化的。

  降落PCR是在同一个PCR管内进行PCR,只是每个循环的温度不同(如每个循环降1度)。一般兼并引物用这种方法多些。

 

降落PCRtouchdown PCR),一种PCR技术:

 设计多循环反应的程序,以使相连循环的退火温度越来越低。由于开始时的退火温度选择为高于估计的Tm值,随着循环的进行,退火温度逐渐降到Tm值,并最终低于这个水平,用于确保第一个引物—模板杂交事件发生在最互补的反应物之间,即那些产生目的扩增产物的反应物之间。尽管退火温度最终会降到非特异杂交的Tm值,但此时目的扩增产物已开始几何扩增,在剩下的循环中处于超过任何滞后(非特异)PCR产物的地位。

 由于目标是在较早的循环中避免低Tm值配对,在TDPCR中好应用热启动技术。设计时,退火温度的范围应跨越15左右,从高于估计Tm值至少几度到低于它10

 例:一对没有简并的引物—模板的计算Tm值为62

 则:从65℃—>50(每2cycles降退火温度1),再在50退火温度下做15个循环。

 实验中如持续出现假象带(杂带),则是因为起始退火温度太低,或目的扩增产物和非目的产物的Tm值相差无几,或非目的扩增物以更高的扩增效率扩增,可把退火温度每降低1所需的循环数增加到34

联系人:巴小姐

021-61640167

13621682589

在线客服

推荐收藏该企业网站